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          禽病診斷試劑盒 豬病診斷試劑盒 牛羊病診斷試劑盒 病原學診斷試劑 霉菌毒素試劑盒

          玉米赤霉烯酮 【名稱】玉米赤霉烯酮
          【英文名稱】Zearalenone
          【品牌】美國AFFINITECH
          【貨號】ZEA-0100
          【規格】96*1/盒

          實驗原理

          本玉米赤霉烯酮的試劑盒采用固相直接競爭酶免疫分析法,用于與玉米赤霉烯酮充分反應的玉米赤霉烯酮的特異性抗體包被在聚苯乙烯微孔中。用70%的甲醇從研磨樣品中提取毒素。如果樣品中含有玉米赤霉烯酮,將與包被的抗體結合。隨后,加入與辣根過氧化酶標記的玉米赤霉烯酮,未與樣品或者標準液中的玉米赤霉烯酮反應的特異性抗體結合。孵育一段時間后,將孔內液體倒出并洗滌,加入辣根過氧化酶的底物(遇辣根過氧化酶變成藍色),顏色的深淺與標記的辣根過氧化酶的玉米赤霉烯酮量呈正比例,與樣品或標準物中的玉米赤霉烯酮的濃度呈反比例。因此,隨著樣品或標準物中的玉米赤霉烯酮濃度的升高,藍色將越淺。加入終止液后,顏色由藍色變成黃色。在酶標儀的450nm處測定吸光度值。將樣品的OD值與試劑盒中的標準品的OD值相比,然后判讀樣品結果。

          使用目的

          玉米赤霉烯酮ELISA是競爭性酶聯免疫反應,用于定量檢測谷類中的玉米赤霉烯酮的含量,如玉米、大麥、燕麥、小麥、大米和高粱,也可用于檢測面包中的玉米赤霉烯酮的含量。

          樣品準備

          注意:必須根據建立的采樣方法收集樣品

          1. 制備提取液(70%甲醇或80%乙腈),將30ml的蒸餾水或去離子水加到70ml化學純的甲醇中,或         者20mL的蒸餾水或去離子水加到80mL化學純的乙腈中用于加入到每個檢測樣品中。

          2. 將樣品磨碎至能夠即溶的顆粒(50%的能夠通過20目的網篩)

          3.秤取20g磨碎的樣品,加入100ml提取液。注:樣品與提取液的比例為1:5(w/v)

          4. 在密閉的容器或混合器上震蕩混合3分鐘。

          5. 顆粒沉降后將5-10ml的提取物用Whatman1號濾紙過濾,收集濾液待測。

          6. 用70%甲醇將樣品按1:10的比例稀釋(例如:0.1ml+0.9ml)

          7. 稀釋過的樣品可用于試驗,最終稀釋率為1:50

          8. 標準品使用前不需要稀釋。

          實驗步驟

          注意:建議采用多道的移液器進行試驗。如果使用單道的移液器,建議樣品和標準品總共不超過16個(2條)

          1. 使用前所有的試劑恢復至室溫,制備洗液,用蒸餾水輕輕將PBS-Tween的小包內容物沖入0.5升的容器   內,用蒸餾水配成0.5升,不使用時放入冰箱保存。

          2. 每個標準品和樣品用1個稀釋孔,放置在微孔架上。放置相同數量的抗體包被的微孔在微孔架上

          3. 每個稀釋孔中加入200μl的樣品稀釋液。

          4. 向對應的稀釋孔中加入100μl的標準品和樣品,每孔換新槍頭。用移液器反復吹打至少3次,使內容物混勻。 注意:在實驗過程中實驗員必須標記每個標準品和樣品的位置。

          5. 吸取稀釋孔中100μl的內容物加入到與之對應的抗體包被微孔中,每孔換新槍頭。室溫下孵育10分鐘。 如果有需要,稀釋孔內有足夠的液體,用于標準品或樣品做重復檢測。

          6. 每個孔中加入100μl的酶結合物,加入酶結合物之前不能將孔內容物倒掉或清洗,將內容物充分混合,   室溫下孵育10分鐘。

          7. 將內容物倒入廢液瓶中,每個微孔加滿PBS-Tween洗液,清洗微孔,然后將微孔中的水倒入廢液瓶中。 反復清洗3次。

          8. 將微孔口朝下在吸水紙上拍打,去除剩余的水

          9. 加入2滴或100μl的TMB底物加入到每個抗體包被孔中,室溫避光孵育10分鐘。

          10.每個微孔中加入2滴(或100μl)的終止液。按照與加入底物相同的順序相同的位置,加入終止液。

          11.利用酶標儀,在450nm處測定并記錄每個微孔的吸光度值(OD)。

          結果判讀

          利用原始的OD值或OD值與無玉米赤霉烯酮的標準值的百分比建立劑量-反應曲線,利用標準曲線計算待測值。